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利什曼原虫诊断试纸条(胶体金法)

利什曼原虫诊断试纸条(胶体金法)

型    号: Novabios
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利什曼原虫诊断试纸条(胶体金法)
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利什曼原虫诊断试纸条(胶体金法)

广州健仑生物科技有限公司

 

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 RK39快速检测试纸条
预期使用
    该检测条用于诊断内脏利什曼病,利用快速的免疫层析法在人血清中定性检测杜氏利什曼原虫(L. donovani)抗体。该实验有助于诊断内脏利什曼病(VL)。并只用于体外诊断。
实验原理
  该检测条的硝化纤维膜在实验区包被了rK39,在质控区包被了鸡抗蛋白A。在实验中,血清样本与胶体金共轭物(胶体金标记的蛋白A)反应,而胶体金共轭物预先包被在检测条上。混合物在毛细管作用下沿着硝化纤维膜移动,然后与重组的VL抗原反应,并生成一条红色带。如果存在该红色带表明阳性结果,反之则为阴性结果。混合物继续移动,到达固化的鸡抗蛋白A区(质控区),会在质控区生成一条红色带。质控区红色带的出现说明样本体积充足、液体流动适宜和作为对试剂的质控。
保存方法
    该密封袋或者瓶中含实验检测条应保存在20—28℃(室温)直至有效期。瓶中含捕获缓冲液也应保存在20—28℃。暴露在超过30℃温度下会影响实验性能,所以应尽量避免。检测条不应冰冻保存。从密封袋中取出后应在1小时内使用,避免受湿度影响。
血清的采集
1该实验中应使用人血清。全血样本不应采用,因为过度的背景可能会影响正确读取实验带。应使用缓冲液稀释血清,避免直接开始实验。阳性血清应使用阴性血清进行稀释。
2 经凝血后离心分离血清,尽量避免溶血。
3 应在采集血清后尽快开展实验。血清不能长时间存放在室温下。血清于2-8℃可保存3天。否则血清应保存在20℃以下。
4 实验前血清平衡至室温。冰冻的血清必须充分融解。血清避免反复冻融。
5 如果血清需要运输,其包装应该符合联邦的传染源运输法规。
试剂盒成分
该黑热病快速检测条的硝化纤维膜在实验区包被了重组的rK39,在质控区包被了鸡抗蛋白A。试剂盒的成分如下:
1、25份的独立包装检测条或者25份检测条于一个含干燥剂瓶子中。
2、1瓶的捕获缓冲液
实验步骤
1 实验前让血清平衡至室温。
2 从密封袋或瓶中取出黑热病快速检测条
3 在检测条箭头下方加入20 ul的血清。
4 将检测条置于实验管中,或者96孔的组织培养板的微孔中,根据检测条上的箭头,其末端应该朝下。
5 加入2-3滴(150ul)的捕获缓冲液
6 在10分钟内读取结果。在读取结果前,背景的清晰是十分重要的。尤其是当样本为低滴度的抗利什曼原虫抗体时,就只有一条很弱的色带出现在实验区(T)。10分钟后读取可能会导致错误结果。
注意:不要只是加入捕获缓冲液进行实验。必须首先加入20ul的血清。
      如果在加入捕获缓冲液后的10-15秒并没有观察到胶体金的移动,可轻轻压检测条上的样本加入区,直到观察到胶体金的移动。
结果解释
阳性结果
实验阳性则质控带和实验带均出现,如图1。阳性结果表明检测到杜氏利什曼原虫抗体。一条微弱的色带也为阳性结果。作为解释指南,实验区的红色带的颜色强度与抗利什曼原虫抗体浓度相关。实验带为“弱阳性”血清样本,实验结果可能为弱阳性红色带与红点之间,几乎为白色背景(“弱阳性”样本则含有对重组抗原低亲和力或者低滴度抗体)。
阴性结果
实验为阴性,则只有质控带出现。一个阴性结果表明无检测到杜氏利什曼原虫抗体。没有出现实验带,如图2。
无效结果
则无出现质控带也没有出现实验带。如果没有出现质控带该实验也无效,即使出现了实验带。建议使用新的检测条和新血清再次进行实验。
注意:实验区的红色带的变化是依赖于抗利什曼原虫抗体浓度。然而,该实验不能检测抗体的定量值和增加的百分比。
预期值:
在流行的地区,该黑热病快速检测条灵敏度为90%或更高。而特异性可能因不能地区而不同。例如在印度104名健康人中超过13名为阳性反应。

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