拉沙热病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）

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基孔肯雅热是由基孔肯雅病毒（CHIKV）引起，经伊蚊传播，以发热、皮疹及关节疼痛为主要特征的急性传染病。1952年首次在坦桑尼亚证实了基孔肯雅热流行，1956年分离到病毒。本病主要流行于非洲和东南亚地区，近年在印度洋地区造成了大规模流行。

埃及伊蚊和白纹伊蚊是本病的主要传播媒介。主要通过感染病毒的伊蚊叮咬而传播。实验室内可能通过气溶胶传播，目前尚无直接人传人的报道。

人群易感性：人对CHIKV普遍易感，感染后可表现为显性感染或隐性感染。

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三、结果观察

观察孔间沉淀线的数目及特征。本试验1-5孔( 1:2、1:4、1:8、1:16和1:32的人抗兔IgG)与中央孔(人血清)之间可出现清晰的乳白色沉淀线(图3)沉淀线。沉淀线与中央孔的距离随抗原的浓度减小而增大。

免疫琼脂双向扩散实验原理、方法、结果观察与注意事项

四、注意事项

1、加样时不要将琼脂划破，以免影响沉淀线的形成。

2、反应时间要适宜，时间过长，沉淀线可解离而导致假阴性、不出现或不清楚。

3、加样时不同浓度抗体和抗原不要混淆，影响试验结果。

4、试验前应做预试验，确定抗体的稀释度。

产气荚膜梭菌是临床上气性坏疽病原菌中最多见的一种梭菌，因能分解肌肉和结缔组织中的糖，产生大量气体，导致组织严重气肿，继而影响血液供应，造成组织大面积坏死，加之本菌在体内能形成荚膜，故名产气夹膜梭菌。

一、含铁牛奶培养基使用原理

含铁牛奶培养基（Iron Milk medium）主要用于产气荚膜梭菌的测定 (GB/T 8538-2008) 。产气荚膜梭菌具有显著发酵乳糖的能力。在牛奶培养液中，迅速分解乳糖产酸，使酪蛋白凝固，并产生大量气体将凝固的酪蛋白冲散，此种强烈发酵现象称“汹涌发酵”，往往在培养6小时即可出现，为本菌特点之一。

含铁牛奶培养基的配制方法与产气荚膜梭菌汹涌发酵

二、含铁牛奶培养基配方(每升)

全脂奶粉：199g

硫酸亚铁：1g

三、含铁牛奶培养基使用方法

1、称取本培养基200g，加入50-60℃温水溶解，分装试管，每管10mL，115℃高压灭菌10min，灭菌后，快速冷却。本培养基必须新鲜配制。

2、取生长旺盛的FT培养液1mL接种于含铁牛奶培养基，46℃水浴培养5h。

3、观察是否有“暴烈发酵”现象。

四、含铁牛奶培养基质量控制

下列质控菌株接种后于46℃水浴培养5h结果如下：

菌 名　　　　　　　菌 号　　 　培养特征

产气荚膜梭菌　　ATCC13124　　 暴烈发酵

大肠埃希氏菌　　ATCC25922 　　不发酵

一、基本原理

硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的蛋白从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质，这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。

二、试剂及仪器

硫酸铵(NH4)2SO4、饱和硫酸铵溶液（SAS）、蒸馏水、PBS (含0.2g/L叠氮钠)、透析袋、超速离心机、pH计、磁力搅拌器。

三、操作步骤

以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体蛋白的硫酸铵沉淀。各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33%-50%。

（一）配制饱和硫酸铵溶液（SAS）

1、将767g硫酸铵边搅拌边慢慢加到1升蒸馏水中。用氨水或硫酸调到pH7.0。此即饱和度为100%的硫酸铵溶液（4.1 mol/L，25℃）。

2、其它不同饱和度铵溶液的配制

（二）沉淀

1、样品（如腹水）20 000g离心30 min（4℃），除去杂质沉淀；

2、保留上清液并测量体积；

3、边搅拌边慢慢加入等体积的SAS到上清液中，终浓度为1:1；

4、将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6小时或搅拌过夜（4℃），使蛋白质充分沉淀。