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SERION风疹病毒IGG抗体检测试剂盒(捕获法)
广州健仑生物科技有限公司
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适配体的筛选文库一般由含有15-40个随机碱基的序列组成,容量约为1013-1015,两端为固定序列,便于PCR扩增。在适配体文库与靶物质孵育阶段,研究者会根据靶物质的特点选用合适的结合缓冲液,这也是筛选过程中需要优化的条件之一。分子量不同的靶物质,其洗脱分离步骤操作差异较大,常用的分离方法主要有以下几种。
1、硝酸纤维素膜印迹法
可将靶物质固定在硝酸纤维素膜上,然后通过分子印迹分析得到能与靶物质结合的随机单链。“适配体”概念的提出者、SELEX方法的*Tuerk等早应用硝酸纤维素膜筛选得到噬菌体T4 DNA聚合酶的适配体,使得该方法在适配体筛选,特别是蛋白类靶物质的筛选中得到广泛应用。Savory在筛选小鼠肝脏上某种蛋白的适配体时,借助硝酸纤维素膜完成适配体的洗脱分离步骤,该研究建立了复杂机制中靶物质的适配体筛选模型。
2、离心沉淀法
能结合上靶物质的随机单链可随靶物质一同被离心沉淀下来,该方法具有耗时短、操作简单等优点,通常用于大分子靶物质(如全菌)适配体的筛选。Hari等在筛选鼠伤寒沙门氏菌适配体时,以全菌作为靶物质,与核酸序列文库室温下共同孵育45 min后,将混合物在1 500×g下离心10 min,去除未与靶物质结合的DNA单链。经过8轮阳性筛选及2轮阴性筛选后,研究者挑选出1条能与鼠伤寒沙门氏菌特异性结合的适配体。