霍乱弧菌快速检测卡

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肠道病 霍乱弧菌快速检测卡（胶体金法）

广州健仑生物科技有限公司

霍乱是由霍乱弧菌所引起的。O1和O139这两种霍乱弧菌的血清型能够引起疾病暴发。大多数的疾病暴发由O1型霍乱弧菌引起，而1992年*在孟加拉国确定的O139型仅限于东南亚一带。非O1非O139霍乱弧菌可引起轻度腹泻，但不会造成疾病流行。

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这里介绍几种细菌脂多糖的提取方法。

一、热酚水法

实验原理：

热酚水法是提取LPS的经典方法，是基于破坏细菌细胞膜及利用苯酚析出蛋白质。将细菌悬液加入热酸——水混合液中，冷却，离心。混合液可分为水溶液层（内含水溶性脂多糖及核酸等）和酸层（内含蛋白质等），近年来发现在酸层中也含糖类；沉淀中含细胞残体。

实验方法：

1、将细菌浓悬液用盐水经2500转/分，离心20分钟洗涤一次。

2、将沉淀的菌体混匀于蒸馏水中，放66℃水浴，然后滴加等量的90%热酚溶液（预热至66℃），边加边摇，而后在66℃水浴中搅拌25分钟。

3、在水浴中冷却，于4℃冰箱过夜。

4、以2000转/分离心15分钟。

5、将上层水溶液吸到另一试管中。

6、剩下的酚层及残渣组分可再加上述同量水在热水浴中搅拌30分钟，冷却，离心，取上层水溶液。

7、将两次提的水溶液混合，置透析袋中于生理盐水中透析2天，其间换几次盐水，以除去酚。

8、透析后的水溶液层经浓缩（如用聚乙二醇在透析袋外层涂抹以除去水分），即为粗制脂多糖，于冰箱内保存备用。