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霍乱肠道病检测试剂盒

霍乱肠道病检测试剂盒

型    号: 弧菌
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霍乱是由霍乱弧菌所引起的。O1和O139这两种霍乱弧菌的血清型能够引起疾病暴发。大多数的疾病暴发由O1型霍乱弧菌引起,而1992年首次在孟加拉国确定的O139型仅限于东南亚一带。非O1非O139霍乱弧菌可引起轻度腹泻,但不会造成疾病流行。霍乱肠道病检测试剂盒

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肠道病 霍乱肠道病检测试剂盒

广州健仑生物科技有限公司

霍乱是由霍乱弧菌所引起的。霍乱弧菌为革兰染色阴性,对干燥、日光、热、酸及一般消毒剂均敏感。霍乱弧菌产生致病性的是内毒素及外毒素。正常胃酸可杀死弧菌,当胃酸暂时低下时或入侵病毒菌数量增多时,未被胃酸杀死的弧菌进入小肠,在碱性肠液内迅速繁殖,并产生大量强烈的外毒素。这种外毒素具有ADP-核糖转移酶活性,进入细胞催化胞内的NAD+的ADP核糖基共价结合亚基上后,会使这种亚基不能将自身结合的GTP水解为GDP,从而使这种亚基处于持续活化状态,不断激活腺苷酸环化酶,致使小肠上皮细胞中的cAMP水平增高,导致细胞大量钠离子和水持续外流。这种外毒素对小肠黏膜的作用引起肠液的大量分泌,其分泌量很大,超过肠管再吸收的能力,在临床上出现剧烈泻吐,严重脱水,致使血浆容量明显减少,体内盐分缺乏,血液浓缩,出现周围循环衰竭。由于剧烈泻吐,电解质丢失、缺钾缺钠、肌肉痉挛、酸中毒等甚至发生休克及急性肾衰竭。

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霍乱肠道病检测试剂盒

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二、超声波处理法

1、将细菌经2500转/分,离心20分钟洗涤1-2次,将沉淀配成2倍于原始菌液浓度的浓菌液。

2、用超声波发生器中频(约相当于12000 cps)处理20分钟。

3、处理液经3000转/分,离心30分钟,吸取上清液即为脂多糖,置4℃冰箱保存备用。

三、煮沸法

1、将培养后得到的浓菌液沸水浴煮沸2小时。

2、置冰箱静置两星期以上(使菌体残渣自由下沉)。

3、3000转/分离心30分钟,取上清夜即为粗脂多糖抗原,置冰箱中保存备用。

在碱性条件下,异硫氰酸荧光素(FITC)的异硫氰酸基在溶液中与抗体蛋白的自由氨基经碳酰胺化而形成,硫碳氨基键(thiocarbmide)结合,主要是蛋白质上赖氨酸的氨基与荧光素的硫碳胺键结合,形成FITC-蛋白质结合物,即荧光抗体或荧光结合物。一个IgG分子中有86个赖氨酸残基,一个IgG分子最多能标记15-20个FITC分子,其反应式如下

 

FITC-N=C=S + N-H2-蛋白质 → FITC-NS-C-N-H2-蛋白质

常用Marsshall (1958)法标记荧光抗体,也可以根据条件采用Chadwick标记法或Clark等(1963)的透析标记法。

1、Marsshall法

(1) 材料

抗体球蛋白溶液、0.5mol/L pH9.碳酸盐缓冲液、无菌生理盐水、异硫氰酸荧光素(FITC)、1%硫柳汞水溶液、50ml小烧杯、4°C冰箱、电磁搅拌器、透析袋、玻棒、pH7.2的0.01mol/L PBS等。

(2) 方法及步骤

① 抗体的准备:取适量已知浓度的球蛋白溶液于烧杯中,再加入生理盐水及碳酸盐缓冲液,使最后免疫球蛋白浓度为20mg/ml,碳酸盐缓冲液容量为总量的1/10,混匀,将烧瓶置电磁搅拌器上(速度适当以不起泡沫为宜)5-10min。

② 荧光素的准备:根据欲标记的蛋白质总量,按每毫克免疫球蛋白加0.01mg荧光色素,用分析天平称取所需的异硫氰酸荧光素粉末。

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