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霍乱弧菌胶体金快速检测卡

霍乱弧菌胶体金快速检测卡

型    号: 肠道病
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霍乱是由霍乱弧菌所引起的。O1和O139这两种霍乱弧菌的血清型能够引起疾病暴发。大多数的疾病暴发由O1型霍乱弧菌引起,而1992年首次在孟加拉国确定的O139型仅限于东南亚一带。非O1非O139霍乱弧菌可引起轻度腹泻,但不会造成疾病流行。霍乱弧菌胶体金快速检测卡

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肠道病 霍乱弧菌胶体金快速检测卡

广州健仑生物科技有限公司

霍乱是由霍乱弧菌所引起的。霍乱弧菌为革兰染色阴性,对干燥、日光、热、酸及一般消毒剂均敏感。霍乱弧菌产生致病性的是内毒素及外毒素。正常胃酸可杀死弧菌,当胃酸暂时低下时或入侵病毒菌数量增多时,未被胃酸杀死的弧菌进入小肠,在碱性肠液内迅速繁殖,并产生大量强烈的外毒素。这种外毒素具有ADP-核糖转移酶活性,进入细胞催化胞内的NAD+的ADP核糖基共价结合亚基上后,会使这种亚基不能将自身结合的GTP水解为GDP,从而使这种亚基处于持续活化状态,不断激活腺苷酸环化酶,致使小肠上皮细胞中的cAMP水平增高,导致细胞大量钠离子和水持续外流。这种外毒素对小肠黏膜的作用引起肠液的大量分泌,其分泌量很大,超过肠管再吸收的能力,在临床上出现剧烈泻吐,严重脱水,致使血浆容量明显减少,体内盐分缺乏,血液浓缩,出现周围循环衰竭。由于剧烈泻吐,电解质丢失、缺钾缺钠、肌肉痉挛、酸中毒等甚至发生休克及急性肾衰竭。

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③ 结合(或标记):边搅拌边将称取的荧光色素渐渐加入球蛋白溶液中,避免将荧光素粘于烧瓶壁(大约在5-10min内加完),加完后,继续避光搅拌12h左右。结合期间应保持蛋白溶液于4°C左右。

④ 透析:结合完毕后,将标记的球蛋白溶液离心(2500r/min) 20min,除去其中少量的沉淀物,装入透析袋中,再置于烧杯中,用pH8.0缓冲盐水透析(0-4°C)过夜。

⑤ 过柱:取透析过夜的标记物,通过葡聚糖凝胶SephadexG-25或G-50柱,分离游离的荧光素,收集标记的荧光抗体进行鉴定。洗脱液:0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.2);过滤量:12ml标记全球蛋白液(过滤前未透析);收集量:20ml(稀释1.7倍左右)。

2、Chadwick法

(1) 试剂和材料

抗体球蛋白溶液、异硫氰酸荧光素、3%重碳酸钠水溶液、0.01mol/L pH8.0 PBS、1%硫柳汞、离心机及离心管、烧杯(25ml)搅拌器、无菌吸管,无菌吸管及毛细滴管、烧杯(500ml)透析袋等。

(2) 方法及步骤

① 抗体准备:用0-4°C的pH8.0磷酸盐缓冲液将球蛋白溶液稀释至浓度为30-40mg/ml,置入25ml烧杯内,放于冰槽中。

② 荧光色素准备:按每毫克免疫球蛋白加入0.01mg荧光素,用3%重碳酸钠水溶液溶解。

③ 将准备的抗体与荧光色素溶液等量混合,充分搅匀,在0-4°C冰箱中结合(登革在磁力搅拌机上持续搅拌)18-24h。

④ 透析和柱层析:方法同Marsshall法。

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