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霍乱弧菌诊断试纸条(快检法)

霍乱弧菌诊断试纸条(快检法)

型    号: 肠道病
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霍乱是由霍乱弧菌所引起的。O1和O139这两种霍乱弧菌的血清型能够引起疾病暴发。大多数的疾病暴发由O1型霍乱弧菌引起,而1992年首次在孟加拉国确定的O139型仅限于东南亚一带。非O1非O139霍乱弧菌可引起轻度腹泻,但不会造成疾病流行。霍乱弧菌诊断试纸条(快检法)

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肠道病 霍乱弧菌诊断试纸条(快检法)

广州健仑生物科技有限公司

霍乱是由霍乱弧菌所引起的。霍乱弧菌为革兰染色阴性,对干燥、日光、热、酸及一般消毒剂均敏感。霍乱弧菌产生致病性的是内毒素及外毒素。正常胃酸可杀死弧菌,当胃酸暂时低下时或入侵病毒菌数量增多时,未被胃酸杀死的弧菌进入小肠,在碱性肠液内迅速繁殖,并产生大量强烈的外毒素。这种外毒素具有ADP-核糖转移酶活性,进入细胞催化胞内的NAD+的ADP核糖基共价结合亚基上后,会使这种亚基不能将自身结合的GTP水解为GDP,从而使这种亚基处于持续活化状态,不断激活腺苷酸环化酶,致使小肠上皮细胞中的cAMP水平增高,导致细胞大量钠离子和水持续外流。这种外毒素对小肠黏膜的作用引起肠液的大量分泌,其分泌量很大,超过肠管再吸收的能力,在临床上出现剧烈泻吐,严重脱水,致使血浆容量明显减少,体内盐分缺乏,血液浓缩,出现周围循环衰竭。由于剧烈泻吐,电解质丢失、缺钾缺钠、肌肉痉挛、酸中毒等甚至发生休克及急性肾衰竭。

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霍乱弧菌诊断试纸条(快检法)

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3、改良法

(1) 试剂和材料

① 0.01mol/L (pH7.2 )PBS。

② 0.5mol/L (pH9.0)碳酸盐缓冲液。

③ 3%重碳酸钠水溶液配法:称1.5g无水碳酸钠充分溶解于50ml灭菌蒸馏水中即成。

④ 其他试剂和材料:l%登革、离心机及离心管、烧杯(25ml)、搅拌器、无菌吸管及毛细滴管、烧杯(500ml)透析袋等。

(2) 方法及步骤

① 取高效价的抗人球蛋白兔免疫血清,分离球蛋白,用盐水(0.15mol/L NaCl)及缓冲液(0.5mol/L NaHCO3-Na2CO3,pH9.0)稀释使每毫升内含抗体l0mg,缓冲液为总量的10%,降温至4°C。

② 加入异硫氰酸盐(FITC)荧光素[蛋白:荧光素=(50-80)mg:lmg],在0-4°C下电磁搅拌12-14h。

③ 用半饱和的硫酸铵将标记球蛋白沉淀分离,除去未结合的荧光素,再用缓冲盐水透析,除去硫酸铵 (用Nessler试剂测验,至隔夜透析的盐水无氨离子及荧光色素为止)。

④ 将制备好的荧光抗体加登革0.01%,分装在lml安瓿中,或冻干,保存于冰箱中(4°C)可以用半年以上,-20°C保存可达2年以上。

4、透析标记法

此法适用于小量抗体的荧光素标记,标记简便,非特异性染色较少。

(1) 试剂和材料 试剂和材料同改良法。

(2) 方法及步骤

① 用pH9.0 0.025mol/L碳酸盐缓冲液,将欲标记免疫球蛋白稀释成1%浓度,装入透析袋中。

② 用同一缓冲液将FITC配成0.1mg/ml的溶液,按10mg/ml球蛋白溶液体积的10倍,将FITC稀释液盛于圆柱形容器内,并使透析袋浸没于FITC液中。

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