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霍乱弧菌检测用免疫血清

霍乱弧菌检测用免疫血清

型    号: 日本生研
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霍乱是由霍乱弧菌所引起的。O1和O139这两种霍乱弧菌的血清型能够引起疾病暴发。大多数的疾病暴发由O1型霍乱弧菌引起,而1992年首次在孟加拉国确定的O139型仅限于东南亚一带。非O1非O139霍乱弧菌可引起轻度腹泻,但不会造成疾病流行。霍乱弧菌检测用免疫血清

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霍乱弧菌检测用免疫血清

广州健仑生物科技有限公司

霍乱是由霍乱弧菌所引起的。霍乱弧菌为革兰染色阴性,对干燥、日光、热、酸及一般消毒剂均敏感。霍乱弧菌产生致病性的是内毒素及外毒素。正常胃酸可杀死弧菌,当胃酸暂时低下时或入侵病毒菌数量增多时,未被胃酸杀死的弧菌进入小肠,在碱性肠液内迅速繁殖,并产生大量强烈的外毒素。这种外毒素具有ADP-核糖转移酶活性,进入细胞催化胞内的NAD+的ADP核糖基共价结合亚基上后,会使这种亚基不能将自身结合的GTP水解为GDP,从而使这种亚基处于持续活化状态,不断激活腺苷酸环化酶,致使小肠上皮细胞中的cAMP水平增高,导致细胞大量钠离子和水持续外流。这种外毒素对小肠黏膜的作用引起肠液的大量分泌,其分泌量很大,超过肠管再吸收的能力,在临床上出现剧烈泻吐,严重脱水,致使血浆容量明显减少,体内盐分缺乏,血液浓缩,出现周围循环衰竭。由于剧烈泻吐,电解质丢失、缺钾缺钠、肌肉痉挛、酸中毒等甚至发生休克及急性肾衰竭。

广州健仑生物有提供多种快速检测试剂盒:

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日本生研霍乱弧菌检测用免疫血清

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二、试剂与仪器

(1)磷酸盐缓冲盐水(PBS):0.01mol/L,pH7.4

(2)荧光标记的抗体溶液:以0.01mol/L,pH7.4的PBS进行稀释

(3)缓冲甘油:9份分析纯无荧光的甘油+1份PBS配制

(4)荧光显微镜

(5)玻片架

(6)滤纸

(7)37°C温箱等。

三、实验步骤

1、标本制备

(1)涂片标本方法:先将载玻片通过火焰3次,冷却后,以接种环(或铂金耳)挑选被检材料均匀涂布成直径约1cm的圆形涂片。如材料太浓,则应预先加适量灭菌生理盐水于另一玻片上,用接种环挑取材料与其混合稀释,待均匀后涂片,也可将生理盐水加入被检材料中,混合均匀后涂片。涂好后,自然晾干。

(2)压印标本方法:用无菌剪子将待检组织标本剪开,用无菌清洁棉球或滤纸将切面的血液吸干,然后以载玻片轻压切面,使之沾上1-2层细胞,然后再在玻片另一处以切面涂拭,得一较厚抹片,将标本自然晾干。

2、标本固定:被检标本的固定是免疫荧光技术中的重要环节,往往对荧光染色效果有明显的影响。除了研究细胞表面抗原可不固定外,一般均应先固定,然后再进行荧光抗体染色。细菌免疫荧光常用的固定剂有丙酮、10%甲醛或甲醇,固定条件为室温3-10min或4°C 30-60min。

3、将固定好的玻片标本置于湿盘中,滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待检标本片上,10min后弃去,使标本保持一定湿度。

4、滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液,使其完全覆盖标本区。

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